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Technical articles赛默飞CFX96实时荧光定量PCR仪是一款高效能的基因检测平台,拥有强大的检测通量和灵敏度,满足不同领域的研究和检测需求。其特点包括:
96孔板高通量设计:一次实验能够处理96个样本,适合高通量筛选、临床诊断及大规模基因表达检测。
五通道荧光检测系统:配备五个独立荧光检测通道,允许用户进行多重PCR反应,一次实验中同时检测多个靶标基因,大大提升实验效率。
快速升降温技术:采用精确的热循环系统,温控精度高,能够显著缩短PCR循环时间,确保实验结果的稳定性和重现性。
实时数据监控与分析:配套的软件可以进行实时荧光信号监控,提供即时数据分析和结果可视化,极大地方便了实验进程中的决策。
高度灵活的实验设置:支持灵活的程序编排,用户可以根据实验需求自由设置温度、时间及循环参数,适用于不同类型的PCR实验。
CFX96在多个领域有着广泛的应用,适应不同的科研与临床需求:
基因表达定量分析:可用于研究基因的相对或绝对表达水平,适用于功能基因研究及药物研发中的靶点筛选。
病原体检测:在临床上广泛用于病毒、细菌等病原微生物的快速检测,包括新兴传染病的诊断及防控。
SNP基因分型:能够精确检测单核苷酸多态性,用于遗传学研究和药物基因组学中的个性化医疗方案开发。
基因突变分析:通过特异性引物和探针设计,可检测基因突变点,尤其适合癌症突变研究和遗传病检测。
食品与环境安全检测:适用于转基因食品检测、环境样本中的微生物监控等领域。
样本准备:从生物样本中提取DNA或RNA,随后进行反转录(如果是RNA样品),以制备cDNA。准备好含有引物、探针及荧光染料的PCR反应混合物。
样本加载:将PCR反应混合物分装至96孔板中,密封光学封板以避免污染。
实验设置:在CFX96的控制软件中设置好PCR反应条件,包括变性、退火、延伸等步骤的时间和温度。选择合适的荧光检测通道。
实验运行与监控:启动仪器,系统会实时监控荧光信号的变化,用户可以随时查看扩增曲线和Ct值。
结果分析与导出:实验完成后,利用软件自动生成标准曲线和Ct值报告,分析基因表达或病原体载量。
赛默飞CFX96实时荧光定量PCR仪的标准货号为1855195。用户在采购时需根据实验需求选择适合的配置,并确认具体货号。
赛默飞CFX96的核心工作原理是基于实时荧光定量PCR(qPCR)。每个PCR反应循环中,模板DNA经历变性、退火和延伸三个步骤,DNA的扩增伴随着荧光染料的结合。荧光信号在每个循环中逐渐增强,仪器通过内置的光电检测器实时捕捉荧光信号,生成扩增曲线并确定Ct值(Cycle threshold)。Ct值越低,说明样品中靶标基因的初始浓度越高。通过与标准曲线对比,能够定量分析样本中的DNA或RNA浓度。
引物与探针设计:确保引物和探针的设计特异性高、退火温度匹配,避免非特异性扩增,提升实验可靠性。
反应体系优化:针对不同实验体系,优化Mg2+、dNTPs、Taq酶等反应物的浓度,确保最佳扩增效率。
标准曲线构建:使用已知浓度的标准品建立标准曲线,确保实验定量分析的准确性。
防止交叉污染:确保实验操作在无菌条件下进行,特别是在样本装载和光学封板步骤,避免气溶胶污染。
数据分析与结果验证:实时监测数据的变化,分析结果时注意样本中的背景荧光干扰,必要时使用多次重复实验确保数据可靠性。
检测通量:一次最多可处理96个样本,适合大规模实验和高通量分析。
荧光检测通道:五通道光学系统,能够同时监测多种荧光信号,用于多重PCR实验中的靶标基因检测。
灵敏度:检测灵敏度高,可检测单拷贝水平的DNA或RNA样本,适合低丰度基因检测需求。
动态范围:宽广的线性动态范围,通常在10^1至10^9拷贝之间,保证了基因表达的高精度定量。
温控性能:CFX96的温控系统精度为±0.2℃,并具有良好的孔间温度均一性,确保所有样本的反应一致性。
扩增速度:通过快速循环技术,可以在较短时间内完成一次完整的PCR实验,提升实验室的工作效率。
赛默飞CFX96实时荧光定量PCR仪凭借其高精度、快速、灵活的实验操作能力,成为生命科学研究、医学检测和基因组学研究中的工具。其多通道检测、高灵敏度与数据自动化分析功能,为科研工作者提供了理想的实验平台,助力科研与临床的快速发展。