萤火虫荧光素酶检测试剂盒厂家是一种高度灵敏、操作简便的实验工具，广泛应用于基因表达分析、药物筛选和生物发光成像等领域

NLuc荧光素酶检测试剂盒（Nano Luciferase Reporter Gene Assay Kit, 10T）是一种专门设计用于检测NanoLuc®荧光素酶活性的高灵敏度实验工具。NanoLuc®荧光素酶是一种小型、高效的荧光素酶，由Promega公司开发，其优异的发光性能使其在基因表达分析、药物筛选和生物发光成像等领域得到了广泛应用。下面是对NLuc荧光素酶检测试剂盒的详细介绍。

1. 萤火虫荧光素酶检测试剂盒厂家：NanoLuc®荧光素酶的基本原理

NanoLuc®荧光素酶（简称NLuc）是一种体积小巧的发光酶，与传统的萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶相比，它具有更高的亮度、更长的发光持续时间以及更的灵敏度。NLuc的分子量仅为19.1 kDa，使其在细胞和生物系统中表现出的稳定性和兼容性。

NLuc荧光素酶的发光反应依赖于其特定的底物Furimazine。通过酶促反应，Furimazine被氧化，产生强烈的蓝光发射（λmax约为460 nm）。由于NLuc的高量子效率，即使是极低水平的酶表达也能产生可检测的光信号，这为检测微量基因表达或低丰度蛋白质提供了可能。

2. 萤火虫荧光素酶检测试剂盒厂家：试剂盒的组成

NLuc荧光素酶检测试剂盒通常包括以下组件：

• NanoLuc®荧光素酶底物（Furimazine）：特异性高的发光底物，能够与NLuc荧光素酶发生反应，产生高强度的光信号。

• 细胞裂解液：用于裂解细胞，释放出其中的NanoLuc®荧光素酶，以便于后续的发光检测。

• 反应缓冲液：优化的缓冲体系，确保在合适的pH和离子强度下进行高效的发光反应。

• 标准品：NanoLuc®荧光素酶的标准溶液，用于建立标准曲线，以便对实验样品中的酶活性进行定量分析。

• 用户手册：详细的操作步骤和注意事项，指导实验的顺利进行。

3. 应用领域

3.1 基因表达分析

NLuc荧光素酶检测试剂盒被广泛应用于基因表达分析。通过将NanoLuc®荧光素酶基因（nluc基因）与目标基因的启动子或调控元件连接，研究人员可以通过检测NLuc的发光强度来定量分析目标基因的表达水平。这种方法特别适用于检测微量基因表达，或在复杂的生物环境中研究基因调控机制。

由于NLuc荧光素酶的高灵敏度，研究人员能够在极低的背景噪音下检测到微弱的基因表达信号，从而在各种实验条件下获得精确的基因表达数据。

3.2 药物筛选

NLuc荧光素酶检测试剂盒在高通量药物筛选（HTS）中表现出色。通过在细胞系中引入NanoLuc®荧光素酶报告基因，研究人员可以评估化合物对特定基因或信号通路的影响。由于NLuc的发光信号强度高、响应快速，筛选过程中能够快速识别出对目标靶点有显著作用的候选化合物。

这种方法特别适用于筛选调节特定基因表达或细胞功能的化合物，帮助加速新药开发的进程。

3.3 生物发光成像

NanoLuc®荧光素酶的另一重要应用是活体生物发光成像。其小巧的结构和高发光效率使其非常适合在活体动物模型中进行生物发光成像。NLuc与Furimazine底物结合，在体内可以产生明亮的发光信号，研究人员可以通过专用的成像设备实时监测动物体内的基因表达或细胞行为。

这种技术在肿瘤生长、细胞迁移、基因表达调控等领域得到了广泛应用。由于NLuc发光的蓝光具有较强的组织穿透能力，研究人员能够获得高分辨率的体内成像数据。

4. 操作步骤

使用NLuc荧光素酶检测试剂盒的典型操作步骤如下：

1. 细胞培养与处理：将表达NanoLuc®荧光素酶的细胞接种于96孔板或其他培养容器中，并根据实验设计进行处理（如药物刺激、基因敲除或过表达）。

2. 细胞裂解：加入适量的细胞裂解液，裂解细胞以释放NanoLuc®荧光素酶。

3. 底物反应：将NanoLuc®荧光素酶底物（Furimazine）加入裂解液中，混匀后立即进行发光检测。

4. 发光检测：使用发光计（Luminometer）测量发光强度。光信号的强度与NanoLuc®荧光素酶的活性成正比，可以根据标准曲线对样品中的酶活性进行定量。

5. 数据分析：根据实验需求，对发光数据进行统计分析，得出基因表达水平或药物效应的结论。

5. 优势与局限性

NLuc荧光素酶检测试剂盒具有许多的优势：

• 超高灵敏度：NanoLuc®荧光素酶比传统的萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶具有更高的发光强度，使其能够检测到极低水平的基因表达或蛋白质活性。

• 快速响应：发光反应几乎是即时的，这使得NLuc适用于需要快速检测的实验。

• 低背景噪声：由于NanoLuc®荧光素酶与其底物的高度特异性，非特异性背景信号极低，这提高了数据的可靠性和精确度。

• 稳定性高：NanoLuc®荧光素酶在各种实验条件下表现出良好的稳定性，减少了实验中的变量影响。

然而，NLuc荧光素酶检测试剂盒也存在一些局限性：

• 光谱特性：NLuc发射的蓝光虽然亮度高，但在一些实验条件下，较长波长的发光可能更适合深部组织成像或减少自体荧光干扰。

• 底物依赖性：NLuc发光系统依赖于专用的Furimazine底物，这可能限制其与其他发光系统的兼容性。

6. 实验注意事项

• 底物处理：Furimazine底物具有一定的光敏性，因此在操作时应避免长时间暴露在强光下，并在避光条件下储存。

• 温度控制：实验过程中应保持合适的温度，通常在室温下操作即可。温度条件可能影响酶的活性和发光反应。

• 数据标准化：为了获得可重复的结果，应在每次实验中使用标准品进行校准，并考虑使用内部对照进行数据标准化。

7. 总结

NLuc荧光素酶检测试剂盒（Nano Luciferase Reporter Gene Assay Kit, 10T）是一种高度灵敏、操作简便的实验工具，广泛应用于基因表达分析、药物筛选和生物发光成像等领域。其小巧的酶结构、高效的发光性能以及低背景噪声使其成为现代分子生物学研究中的重要工具。随着生物技术的发展，NLuc荧光素酶系统将继续在科学研究中发挥关键作用，推动基因调控、药物发现和生物成像等领域的进步。