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应用领域 | 医疗卫生,环保,生物产业,制药,综合 |
5× 蛋白印迹膜再生液(Strong)(10 mL)是一种专为蛋白印迹实验(Western blot)设计的高效再生试剂,旨在强效去除膜上的抗体和探针,同时保留目标蛋白的完整性。与温和型再生液相比,Strong版本具有更强的去除能力,适用于去除难以洗脱的抗体或在多次孵育中使用的抗体。这种再生液特别适合在需要多次检测或优化实验条件时重复使用印迹膜,提供了一种经济且高效的实验方法。
5× 蛋白印迹膜再生液(Strong)是一种高浓缩试剂,使用前需要稀释至1×工作浓度。其强效配方能够有效去除印迹膜上的一抗和二抗,同时尽量减少对目标蛋白的影响。该再生液适用于PVDF膜和硝酸纤维素膜,特别是在需要去除顽固的抗体信号时表现优异。
再生液(Strong)的成分通常包括以下几类化学试剂,它们共同作用,帮助强效去除抗体和探针,同时尽量保护目标蛋白:
SDS(十二烷基硫酸钠):一种常见的去污剂,能够有效去除膜上的蛋白质,包括结合紧密的抗体。SDS在再生液中的浓度较高,确保对抗体的去除。
β-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol):一种还原剂,能够破坏抗体分子之间的二硫键,进一步帮助去除抗体。
碱性或酸性缓冲液:再生液可能含有碱性(如NaOH)或酸性(如HCl)成分,帮助破坏抗体与膜之间的结合,特别是那些通过强非共价键结合的抗体。
蛋白质稳定剂:即使在强效条件下,这类试剂也能帮助稳定目标蛋白,防止其在再生过程中被降解或变性。
该再生液主要用于Western blot实验中对蛋白印迹膜的再生。它允许在同一块膜上多次进行抗体检测,特别适合检测多个不同的蛋白质或在不同条件下重复实验。
再生液(Strong)适用于去除在膜上具有强亲和力的抗体,尤其是那些在常规再生条件下难以洗脱的抗体。它可以有效清除这些抗体,确保膜在再次使用时没有残留信号。
当需要优化抗体浓度、孵育时间或其他检测条件时,使用再生液(Strong)可以避免每次都重新准备新的印迹膜,从而节省时间和资源。
使用5× 蛋白印迹膜再生液(Strong)进行膜再生的步骤如下:
再生液稀释:将5×再生液按1:5的比例稀释至1×工作浓度。根据膜的大小准备足够量的再生液,确保膜能够浸没。
去除抗体:将膜放入1×再生液中,轻轻摇动,在室温或略高温度下孵育10-15分钟。较长的孵育时间可以确保去除强结合的抗体。
冲洗膜:孵育结束后,用PBS或TBS缓冲液多次洗涤膜(通常3-4次,每次5分钟),以去除残留的再生液和抗体。
检测再生效果:可在PBS/TBS中短暂孵育膜,检测是否去除了抗体信号。如果有残留,可以重复再生步骤。
重新检测:再生后的膜可以重新进行抗体孵育,重复Western blot检测过程。
Strong再生液能够去除紧密结合的抗体,特别是那些经过多次孵育或使用高亲和力抗体检测后的膜。其强效配方确保抗体信号清除。
尽管是强效再生液,配方仍然经过优化,能够在去除抗体的同时最大限度地保留目标蛋白,确保再生后的膜可以用于后续的检测。
通过重复使用同一块印迹膜,再生液能够显著减少实验耗材和抗体的消耗,降低实验成本,尤其在使用昂贵抗体时优势明显。
使用时长:由于Strong再生液的去除能力较强,建议不要超出推荐的孵育时间,以防止膜上蛋白质的流失。
多次再生:虽然再生液能有效去除抗体,但每次再生都会对膜上的蛋白质有一定影响,建议最多再生2-3次,以确保膜上的蛋白质仍然保留。
储存条件:再生液应存放在4°C,并避免长时间暴露在光线下,以保证其有效性。
在研究复杂的蛋白质相互作用网络时,研究人员使用5× 蛋白印迹膜再生液(Strong)对PVDF膜进行多次再生处理,分别检测了不同时间点的信号蛋白表达情况。强效的再生液确保了每次检测前都能去除上一次的抗体信号,从而获得清晰、可靠的实验结果。
在信号通路分析实验中,使用再生液(Strong)处理后的膜多次用于不同磷酸化抗体的检测。再生液的强效去除能力使得研究人员能够在同一膜上检测多种磷酸化状态,节省了实验时间和样品量。
5× 蛋白印迹膜再生液(Strong)(10 mL)是一种强效的实验试剂,特别适合需要去除顽固抗体信号的Western blot膜再生应用。其高效的去除能力和对蛋白质的保护作用,使其成为实验室中重复利用印迹膜的理想选择。通过使用该再生液,研究人员能够大幅降低实验成本,提高实验效率,并获得更可靠的多重检测结果。